流式细胞仪调试和使用
编辑：赵婷 来源： 日期：2023/2/15 13:23:54
调试和校准
流式**仪在使用前，流式**仪调试和使用甚*在使用过程中都要*心进行调试，以保证工作的可靠性和*佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。
激光强度：*调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为*大。
液流速度：可通过操作台数字显示监督，** 气体**大小以获得稳定的液流速度。
测量区光路** ：这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交，而且交点较小。*般可在用标准荧光微球等校准中完成。
流式**术中所测得的量是相对值，因此需要在使用前或使用中对系统进行校准或标定，这样才能通过相对测量获得**的意义。因而FCM中的校准具有双重功能：仪器的准直调整和定量标度。标准样品应该稳定，有形成份形状应是大小比较*致球形，样品分散性能良好，且经济、容易获得。常用标准荧光微球作为非生物学标准样品，鸡血红**做为生物学标准样品。微球用树脂材料制作，或标有荧光素，或不标记荧光素。所用的鸡血红**标准样品制作过程昭下：取3.8%枸橼酸或肝素*凝的鸡血（*凝剂：鸡血=1：4），经PBS清洗3次，再用5～10ml的1.0%戊二醛与清洗后的鸡红**混合，室温下振荡醛*24h，*后经PBS再清洗，贮4℃冰箱中备用。流式**仪调试和使用需要指出的是因为未经荧光染色，所测光信号为鸡血红蛋白的自发荧光。
仪器的操作和使用
1)打开电源，对系统进行预热；
2)打开气体阈，** **，获得适宜的液流速度；开启光源冷却系统；
3)在样品管中加入*离子水，冲洗液流的喷嘴系统；
4)利用校准标准样品，调整仪器，使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上，0和90散射的荧光强度*强，并要求变异系数为*小；
5)选定流速、测量**数、测量参数等，在同样的工作条件下测量样品和对照样品；同时选择计算机屏上数据的显示方式，从而能直观掌握测量进程；
6)样品测量完毕后，再用*离子水冲洗液流系统；
7)因为实验数据已存入计算机硬盘（有的机器还备有光盘系统，存贮量更大），因此可关闭气体、测量装置，而单*使用计算机进行数据处理；
8)将所需结果打印出来。
操作和使用中的注意事项
1）光电倍增管要求稳定的工作条件，暴露的较强的光线下以后，需要较长时间的“暗适应”以**或降低部分暗电流本底才能工作；另外还要注意磁屏蔽；
2）光源不得在短时间内（*般要1h左右）关上又打开；使用光源*须预热并注意冷却系统工作是否正常；
3）液流系统*需随时保持液流畅通，避免气泡栓塞，所使用的鞘流液使用前要经过过滤、**；
4）注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等；
5）特别强调每次测量都需要对照组。
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